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產(chǎn)品中心

Product Center
LabFD SpeI 快速內(nèi)切酶
產(chǎn)品簡介

LabFD SpeI 快速內(nèi)切酶經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn):5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。

產(chǎn)品型號:
更新時(shí)間:2026-01-08
廠商性質(zhì):代理商
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SpeI快速內(nèi)切酶


產(chǎn)品貨號F5574s

儲存條件-20℃


同裂酶:AhlI,BcuI

注:同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成

組分

規(guī)格

LabFD™ SpeI

50ul

10×LabFD™ Buffer

1ml

10×LabFD™ Color Buffer

1ml


產(chǎn)品簡介

LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的高保真限制性內(nèi)切酶適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn):5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應(yīng)體系;良好的酶活冗余度,輕松應(yīng)對底物過量或困難模板酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。

建議反應(yīng)條件

LabFD™緩沖液;

37℃溫育;

參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育20min

功能活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,在20ul反應(yīng)體系中,1ul LabFD™ SpeI能夠在15min內(nèi)*消化1ugpUC19-SpeI DNA

超長時(shí)間溫育檢測

最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ SpeI與1ug pUC19-SpeI DNA共同溫育3h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應(yīng)溫度下,使用1ul LabFD™ SpeI消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

非特異性內(nèi)切酶活性檢測

最shi反應(yīng)溫度下,將1ul LabFD™ SpeI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

藍(lán)白斑檢測

將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ SpeI消化,重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落,而連接錯(cuò)誤(即DNA末端切口不完整)的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于 LabFD™ 系列限制酶而言,白色菌落比例應(yīng)小于1%。

使用方法

1、DNA快速酶切流程

1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系:


質(zhì)粒DNA

PCR產(chǎn)物

基因組DNA

ddH2O

15ul

16ul

30ul

10×LabFD Buffer或10×LabFD Color Buffer

2ul

3ula

5ul

底物DNA

2ul

(up to 1ug)

10ul(~0.2ug)

10ul(5ug)

LabFD  SpeI

1ul

1ul

5ul

Total

20ul

30ul

50ul

注:本體系適用于經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物酶切,未純化的PCR具備一定的離子強(qiáng)度,10xLabFDTMbuffer加入量可適當(dāng)減少至2ul。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性,會影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,建議酶切前對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

1)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴;

2)37℃溫育15min(質(zhì)粒),或15~30min(PCR產(chǎn)物),或30~60min(基因組DNA);

3)80℃溫育20min即可使酶失活,停止反應(yīng)。

2、雙酶切或多酶切

1) 每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul,并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系;

2) 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10;

3) 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最shi反應(yīng)溫度不同,應(yīng)先以最shi溫度低的酶開始酶切,再添加最shi溫度較高的酶,在其最shi反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

DNA

1ug

2ug

3ug

4ug

5ug


LabFD™ SpeI


1ul

2ul

3ul

4ul

5ul

10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

2ul

2ul

3ul

4ul

5ul

Total

20ul

20ul

30ul

40ul

50ul


注:如果總反應(yīng)體系大于20ul,應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

7

0

0

0

0

0

0

3


甲基化修飾影響

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

無影響

無影響

無影響

序列可能重疊

剪切可能受影響

序列可能重疊

剪切可能受影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性


LabFD Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart®Buffer

Takara

QuickCut™Buffer

活性

百分之bai

百分之bai

百分之bai

百分之bai


注:活性數(shù)據(jù)來LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。

                                              


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