熒光染料NO.33258

產(chǎn)品貨號(hào)：B2883-1

存儲(chǔ)條件：?20℃ ，保質(zhì)期3年

產(chǎn)品描述

熒光色素；用于DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術(shù)。Hoechst 33258 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。

產(chǎn)品性質(zhì)

物理性狀

黃色至深黃色粉末；溶于水，黃或棕色溶液，參考濃度為9.80 - 10.20 mg/ml；熔點(diǎn)＞300℃。

用途

細(xì)胞遺傳學(xué)研究的常用試劑，熒光染色細(xì)胞的DNA ，插入DNA的A-T區(qū)，具有低的細(xì)胞毒性，形成膜滲透性熒光DNA鏈。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

配制母液

Hoechst 33258溶于水，溶解度可達(dá)10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。

注意事項(xiàng)

1) Hoechst 33258 對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2) 熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3) 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法    

1.用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.固定的細(xì)胞或組織染色：

對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色。

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。

3.活細(xì)胞或組織染色：

a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。

b)在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

c)用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。